動物脾臟有上百萬種不同的B淋巴細胞系，選擇性表達出不同基因的B淋巴細胞合成不同的抗體。當機體受抗原刺激時，抗原分子上的許多決定簇分別啟用各個表達不同基因的B細胞。被啟用的B細胞分裂增殖形成效應B細胞(漿細胞)和記憶B細胞，大量的漿細胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分佈到血液、體液中。如果能選出一個製造一種專一抗體的漿細胞進行培養，就可得到由單細胞經分裂增殖而形成細胞群，即單克隆。單克隆細胞將合成針對一種抗原決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。
製備過程：
1、免疫動物 免疫動物是用目的'抗原免疫小鼠，使小鼠產生致敏B淋巴細胞的 過程。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠，按照預先制定的免疫方案進行免疫注射。 抗原通過血液迴圈或淋巴迴圈進入外周免疫器官，刺激相應B淋巴細胞克隆，使其活化、增殖，並分化成為致敏B淋巴細胞。
2、細胞融合 採用二氧化碳氣體處死小鼠，無菌操作取出脾臟，在平皿內擠壓研磨，製備脾細胞懸液。 將準備好的同系骨髓瘤細胞與小鼠脾細胞按一定比例混合，並加入促融合劑聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各種淋巴細胞可與骨髓瘤細胞發生融合，形成雜交瘤細胞。
3、選擇性培養 選擇性培養的目的是篩選融合的雜交瘤細胞，一般採用HAT選擇性培養基。在HAT培養基中，未融合的骨髓瘤細胞因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，不能利用補救途徑合成DNA而死亡。 未融合的淋巴細胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉移酶，但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細胞由於從脾細胞獲得了次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶，並具有骨髓瘤細胞能無限增殖的特性，因此能在HAT培養基中存活和增殖。
4、雜交瘤陽性克隆的篩選與克隆化 在HAT培養基中生長的雜交瘤細胞，只有少數是分泌預定特異性單克隆抗體的細胞，因此，必須進行篩選和克隆化。通常採用有限稀釋法進行雜交瘤細胞的克隆化培養。採用靈敏、快速、特異的免疫學方法，篩選出能產生所需單克隆抗體的陽性雜交瘤細胞，並進行克隆擴增。經過全面鑑定其所分泌單克隆抗體的免疫球蛋白型別、亞類、特異性、親和力、識別抗原的表位及其分子量後，及時進行凍存。
5、單克隆抗體的大量製備 單克隆抗體的大量製備重要採用動物體內誘生法和體外培養法。
(1)體內誘生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進行預處理。1-2周後，腹腔內接種雜交瘤細胞。雜交瘤細胞在小鼠腹腔內增殖，併產生和分泌單克隆抗體。約1-2周，可見小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。
(2)體外培養法 將雜交瘤細胞置於培養瓶中進行培養。在培養過程中，雜交瘤細胞產生並分泌單克隆抗體，收集培養上清液，離心去除細胞及其碎片，即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產生的抗體量有限。各種新型培養技術和裝置不斷出現，大大提高了抗體的生產量。
