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臨床醫學檢驗技士備考資料:抗血清的鑑定

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動物血採集後,立即分離出血清,此抗血清在儲存或應用前,必須作效價和特異性鑑定。

臨床醫學檢驗技士備考資料:抗血清的鑑定

  (一)雙向免疫擴散法鑑定抗體的特異性

按雙向免疫擴散技術打兩排孔,上排放抗原粗提物(如抗原來自動物血清則放相應的混合血清)和純化抗原,下排加抗血清,進行雙擴散18~24h後,仔細觀察上下兩排孔之間出現的沉澱線。若與粗抗原及純抗原之間皆出現一條沉澱線,且兩者互相融合,則證明該動物已產生單價特異性抗體;不出現沉澱線,表明示免疫成功。若與純化抗原出現一條,而與粗抗原出現多條線,且其中一條沉澱線與純抗原沉澱線相連線,也是成功的'免疫,待取血後將雜抗體吸收去除,可以成為單價特異性抗體。

  (二)雙向免疫擴散法則定抗血清效價

測定抗血清效價有兩種稀釋方法:一是稀釋抗血清,如1/2、1/4、1/8、1/16對倍稀釋,分別與一個濃度的純抗原反應;另一是稀釋抗原,即把抗原作對倍稀釋或按濃度(如mg/ml)進行稀釋,分別與不同濃度的抗血清進行雙擴散試驗(稱為盤滴定),見表10-1。

表10-1抗血清效價測定

表中+~+++代表出現沉澱線的濃度,如1:8抗體出現中等濃度沉澱線,與1:16、1:32則出現較弱的沉澱線。按表10-1的互為比例稀釋後確定抗血清的效價為1:32,最佳抗原濃度為1:16。效價在1:8以上即可採用於一般試驗。

  (三)其他鑑定方法

有時,因抗原特殊,沉澱線不易出現,特別是製備的抗血清將用於某種試驗時,則考慮用其它方法(如血凝試驗、抑制試驗、中和試驗、放射免疫技術等)測定其效價。